ATCC原代細胞

簡要描述：ATCC細胞是什么 |ATCC原代細胞 青旗生物
青旗（上海）生物技術發展有限公司新增細胞庫，上千株細胞由青旗生物專業的技術人員自己培養，其中幾百株人源細胞已通過（STR鑒定），細胞開春大放送，下單就有好禮相送，歡迎咨詢。。。。

更新時間：2022-10-25

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一、簡介:  

上海青旗生物有限公司提供ATCC原代細胞，ATCC菌株代購，同時上海青旗生物新增細胞庫，具有自己的研發細胞培養庫，上千株細胞具有STR鑒定，開春大放送，*，同時還有好禮相送，具體歡迎咨詢我們銷售人員。。。。  

二、原代細胞培養介紹：  

(1)原理細胞培養(Cellculture)是模擬機體內生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發展成一種重要生物技術，并取得顯著成就。由體內直接取出組織或細胞進行培養叫原代培養。原代培養細胞離體時間短，性狀與體內相似，適用于研究。一般說來，幼稚狀態的組織和細胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養。  

(2)操作：1．取材用頸椎脫位法使乳兔迅速死亡。然后，把整個動物浸入盛有75％乙醇的燒杯中數秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用消過毒的剪刀剪開用碘酒和乙醇再次消毒后的皮膚，剖腹取出肝臟或腎臟。置于無菌平皿中。2．切割用滅菌的PBS液將取出的臟器清洗三次，然后用眼科手術剪刀仔細將組織反復剪碎，直到成1mm3左右的小塊，再用PBS清洗，洗到組織塊發白為止。移入無菌離心管中，靜置數分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清。3．消化、接種培養吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液1ml，加入離心管中，與組織塊混勻后，加上管口塞子，37℃水浴中消化8～10分鐘，每隔幾分鐘搖動一下試管，使組織與消化液充分接觸，靜止，吸去上清，向離心管中加入5～10ml含5％小牛血清的MEM培養基，用吸管吹打混勻，移入二個培養瓶中，置于二氧化碳培養箱中培養。  

(3)結果細胞接種后一般幾小時內就能貼壁，并開始生長，如接種的細胞密度適宜，5天到一周即可形成單層。  

三、器材及液體的準備和無菌操作的注意事項：  

(1)器材和液體的準備細胞培養用的玻璃器材，如：培養瓶、吸管等在清洗干凈以后，裝在鋁盒和鐵筒中，120℃，2小時干烤滅菌后備用；手術器材、瓶塞、配制好的PBS液用滅菌鍋15磅，20分鐘蒸氣滅菌；MEM培養液、小牛血清、消化液用G6濾器負壓抽濾后備用。  

(2)無菌操作中的注意事項在無菌操作中，一定要保持工作區的無菌清潔。為此，在操作前要認真地洗手并用75％乙醇消毒。操作前20～30分鐘起動超凈臺吹風。操作時，嚴禁說話，嚴禁用手直接拿無菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如止血鉗、鑷子等去拿。培養瓶要在超凈臺內才能打開瓶塞，打開之前用乙醇將瓶口消毒，打開后和加塞前瓶口都要在酒精燈上燒一下，打開瓶口后的操作全部都要在超凈臺內完成。操作完畢后，加上瓶塞，才能拿到超凈臺外。使用的吸管在從消毒的鐵筒中取出后要手拿末端，將*在火上燒一下，戴上膠皮**，然后再去吸取液體?？傊?，在整個無菌操作過程中都應該在酒精燈的周圍進行。  

四、ATCC原代細胞凍存方法：  

（1）選擇處于對數生長期的細胞，在凍存前一天*換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心（1000r/min，10分鐘）。  

（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為3×106～1×107/mL之間。  

（3）將上述細胞分裝于安瓿或冷凍塑料管中，安瓿裝1～1.5mL在火焰噴燈上封口，封口處要*封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細胞種類及代次、凍存支數）。  

（4）將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內；置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入4℃冰箱中2～3小時，再移至冰箱冷凍室內3～4小時（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態部分存放2小時，蕞后沉入液氮中。  

（5）細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，*取出一只安瓿細胞復蘇培養，觀察生長情況，然后再繼續凍存。  

五、細胞的復蘇：  

1、細胞復蘇的原則  

在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內，再次形成胞內結晶損傷細胞。  

2、細胞復蘇的主要操作步驟  

(1)佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。  

(2)迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內使其*融化，然后在無菌下取出細胞。  

(3)在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養液后接種于培養瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養，次日更換一次培養液，繼續培養，觀察生長情況。